Sequenciamento de nova geração em tumores de células granulares esporádicos

O tumor de células granulares (TCG) é uma lesão benigna rara de tecido mole, que afeta principalmente a região da cabeça e pescoço, principalmente a língua. A patogênese molecular do TCG ainda é desconhecida, e a maioria dos estudos se concentra em análises imunohistoquímicas e ultraestruturais. Nosso objetivo foi encontrar mutações condutoras no TCG oral, por meio do sequenciamento de genes comumente alterados em neoplasias humanas, incluindo o PTPN11 para o qual mutações foram previamente relatadas no TCG associadas à síndrome de LEOPARD e NOONAN.

Seis amostras fixadas em formol e embebidas em parafina de TCG oral foram sequenciadas usando o Ion AmpliSeqTM Cancer Hotspot Panel v2, que abrange 2.856 mutações do hotspot COSMIC em 50 oncogenes e genes supressores de tumor. A imuno-histoquímica foi realizada para o ki-67 e para os marcadores de sinalização de dano ao DNA, phospho-chk2 e phospho-histona H2A.X.

Mutações de PTPN11 nos exons 12 e 8 não foram detectadas em nenhuma amostra. Identificamos seis variantes de nucleotídeo único missense (SNV) sequenciadas em alta profundidade.  ATM p.Ala2883Val foi previsto pela análise in silico tendo um efeito deletério na proteína. O baixo padrão de imunomarcação de duas proteínas da via ATM confirma esse efeito prejudicial. Os outros SNVs foram tolerados (GNAQ p.Val240Met, KDR p.Asp257Asn e SMO p.Glu224Asp) ou preditos como possíveis deletérios apenas por PolyPhen, mas não por SIFT. KDR p.Gln472His e TP53 p.Pro72Arg foram listados como SNPs comuns (rs1870377 e rs1042522 respectivamente), pelo menos um deles apareceu em todas as amostras.

Danos no DNA podem ser causados por agentes endógenos e / ou exógenos e promovem respostas celulares que podem deter a progressão do ciclo celular, reparo do DNA e apoptose. ATM é uma proteína de sensor de dano que inicia cascatas de transdução de sinal e fosforila Chk2. A histona H2A.X também é um substrato de ATM e sua fosforilação ocorre em resposta a quebras de dupla fita de DNA. A mutação ATM leva a falhas na detecção e reparo de danos no DNA, que por sua vez resultam em acúmulo de mutação (figura 1).

 Apesar da variante  ATM ter um efeito deletério, sua patogenicidade ainda não foi testada. A avaliação de mutações em 50 oncogenes e genes supressores de tumor no TCG oral não revelou SNV patogênico.

Figura 1 Resposta de dano ao DNA mediada por ATM. 

Autora: Josiane Alves França (jojoaf@gmail.com)

Leia o trabalho completo: 

França JA et al. Sporadic granular cell tumours lack recurrent mutations in PTPN11, PTEN and other cancer-related genes. JCP Online , v. 71, p. 93-94, 2017.