Conheça alguns dos trabalhos realizados pelos pesquisadores de mestrado, doutorado e iniciação científica do Lab Patomol

*Todos os projetos são financiados pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-CNPq, Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-CAPES e Fundação de Amparo á Pesquisa de Minas Gerais-FAPEMIG

EFEITOS DA RADIAÇÃO EMITIDA PELOS APARELHOS DE TELEFONE CELULAR NAS GLÂNDULAS PARÓTIDAS

Pesquisadores envolvidos: Fabrício Tinôco Alvim de Souza (doutorado), Ricardo Santiago Gomez (orientador), Carolina Cavaliéri Gomes (co-orientadora), Jeane de Fátima Correia-Silva (co-orientadora)

A radiação emitida por telefones celulares tem gerado grande discussão como possível fator carcinogênico para as glândulas parótidas. Na literatura existem trabalhos com resultados controversos até o presente momento sobre este assunto. Esta pesquisa visa avaliar os efeitos do uso do telefone celular nas glândulas parótidas. Serão avaliados acadêmicos do curso de odontologia que foram previamente selecionados através de um questionário e agrupados entre os que usavam diariamente e por maior período o telefone celular. Serão investigados os efeitos da radiação emitida pelos telefones celulares sobre genes relacionados ao ciclo celular. Os resultados deste estudo ajudarão elucidar os eventos relacionados ao uso de telefones celulares sobre as glândulas parótidas. 

ANÁLISE DO GENE PRKAR1A EM TUMORES ODONTOGÊNICOS

Pesquisadores envolvidos: Sílvia Ferreira de Sousa (doutorado); Vanessa Fátima Bernardes (pos-doutorado); Carolina Cavaliéri Gomes (orientadora)

Os tumores odontogênicos compreendem um grupo de lesões raras que derivam dos tecidos que formam os dentes. O gene PRKAR1A codifica a subunidade regulatória RI-α da proteína kinase A (PKA) e está envolvido no controle da proliferação celular e diferenciação O estudo de Perdigão et al. (2005) demonstrou a participação da alteração molecular do PRKAR1A na patogênese do mixoma odontogênico, no entanto, até o momento, nenhum estudo investigou alterações do gene PRKAR1A em outros tumores odontogênicos, sejam eles ectomesenquimais, mistos ou epiteliais. Objetivo: O objetivo deste estudo é investigar alterações no gene PRKAR1A em tumores odontogênicos. Metodologia: Pacientes da Clínica de Patologia e Semiologia Odontológicas da Faculdade de Odontologia da UFMG com diagnóstico de tumor odontogênico serão convidados a participar deste estudo. Serão coletadas amostras de tumores odontogênicos obtidas após biópsia incisional ou excisional. As amostras coletadas serão processadas e analisadas para a avaliação de parâmetros moleculares. Serão investigadas nas amostras alteração do PRKAR1A em nível de DNA, RNA mensageiro e expressão protéica. Será realizado estudo de perda de heterozigosidade da região do gene para 5 marcadores microsatélites, análise imunoistoquímica da subunidade R1-α da PKA, análise da expressão gênica por PCR quantitativo em tempo real e presença de mutações no gene PRKAR1A por sequenciamento direto dos éxons.
   

A via PKA/cAMP está envolvida no controle do metabolismo, proliferação celular, diferenciação e apoptose. Quando o gene PRKAR1A está alterado, ocorre um aumento na transcrição dos genes responsáveis pela proliferação celular.

INVESTIGAÇÃO DA PERDA DE HETEROZIGOSIDADE DE GENES SUPRESSORES DE TUMOR EM NEUROMA ENCAPSULADO EM PALIÇADA

Pesquisadores envolvidos: Leonardo Nogueira Rodrigues (iniciação científica), Clarice Ferreira Galvão (mestrado), Carolina Cavaliéri Gomes (co-orientadora), Ricardo Santiago Gomez (orientador)

O neuroma encapsulado em paliçada é uma lesão reacional com etiologia incerta que acomete frequentemente a região da face, pescoço e mucosa oral de indivíduos adultos entre a 5ª e 7ª década de vida, sem predileção por sexo. Clinicamente a lesão é bem circunscrita, séssil, com um tamanho de 2 a 3 mm, firme, solitária e assintomática. Histopatologicamente a lesão é frequentemente encapsulada, embora a cápsula possa ser incompleta. O objetivo deste trabalho é avaliar a perda de heterozigosidade (Loss of Heterozygosity- LOH) em regiões de microssatélites próximas a genes supressores de tumor através da análise de DNA, normal e tumoral, das amostras selecionadas. Para isso, será selecionado um painel de marcadores para regiões supressoras de tumor e DNA será extraído e amplificado através da reação em cadeia da polimerase (Polymerase chain reaction- PCR). Os produtos de PCR amplificados serão revelados em gel de poliacrilamida a 8% e posteriormente analisados por eletroforese capilar no equipamento ABI-PRISM 310 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).  LOH é considerada quando um alelo (pico) na amostra de tumor for menor em mais do que 50% quando comprado com a amostra normal. A LOH é calculada baseando-se no valor da altura do alelo 1 sobre a altura do alelo 2 nas amostras de tecido normal, dividido pela  altura do alelo 1 sobre a altura do alelo 2 nas  amostras de tecido tumoral(VAN HOUTEN et al., 2000). Os resultados que apresentarem valores <0,5 ou > 2 serão considerados LOH.

INFUÊNCIA DE MECANISMOS EPIGENÉTICOS SOBRE O GENE INF-ϒ NAS LESÕES DE GRANULOMA PERIAPICAL E CISTO RADICULAR

Pesquisadores envolvidos: Kelma Campos (doutorado), Ricardo Santiago Gomez (orientador)

O Granuloma Periapical e o Cisto Radicular são lesões inflamatórias crônicas formadas em resposta à necrose do tecido pulpar e visam conter a disseminação dos microrganismos para região periapical, sendo detectadas, radiograficamente, pela formação de uma área radiolúcida próxima ao ápice radicular do dente afetado que caracteriza a perda óssea na região, estimulada pela ação de determinadas citocinas. O objetivo do nosso estudo é avaliar a expressão do Interferon Gamma nas lesões de Granuloma Dentário e Cisto Radicular, além da possível influência da Metilação e de microRNAs 146a e 155 sobre a expressão deste gene. As lesões periapicais coletadas serão submetidas ao exame histopatológico e após a extração do DNA será realizado a Methylaton-specific polymerase chain reaction (MSP) para verificar o padrão de Metilação. A expressão do mRNA do Interferon Gamma e dos microRNAs 146a e 155  será analisada através do Quantitative Polymerase chain reactions (qPCR) usando o RNA isolado de parte das amostras coletadas e a expressão da proteína Interferon Gamma será verificada através da Imunoistoquímica.

ESTUDO DA PERDA DE HETEROZIGOSIDADE EM QUEILITE ACTÍNICA E CARCINOMA DE CÉLULAS ESCAMOSAS DE LÁBIO

Pesquisadores envolvidos: Gefter Thiago Batista Correa (doutorado), Lissur Azevedo Orsine (iniciação científica), Vanessa Fátima Bernardes (co-orientadora), Carolina Cavaliéri Gomes (orientadora)

O lábio é considerado uma região de frequente desenvolvimento de carcinoma, correspondendo a 30% dos carcinomas de cavidade oral e 2.06% de todas as neoplasias humanas.  Embora vários estudos venham sido feitos no intuito de elucidar a patogênese do carcinoma de células escamosas de lábio (CCEL), os mecanismos moleculares envolvidos na ocorrência do CCEL necessitam ser melhor elucidados. A Queilite actínica é uma lesão cancerizável do lábio que apresenta fatores etiológicos e clínicos semelhantes aos do CCEL, (ABREU et al., 2006). Como as alterações moleculares do CCEL e da queilite actínica ainda não estão bem descritas, o objetivo do presente estudo é investigar em CCEL e queilite actínica a perda de heterozigosidade em regiões genômicas que previamente demonstraram alta frequência de perda alélica em uma ampla gama de neoplasias epiteliais malignas, incluindo o carcinoma de células escamosas intra-oral.  Pretende-se neste estudo verificar se a LOH nas regiões estudadas são eventos frequentes no CCEL e se a queilite actínica compartilha das mesmas alterações moleculares do CCEL. Pretende-se ainda investigar a associação entre a LOH em locus específicos e fatores prognósticos específicos do CCEL, como o tamanho do tumor, presença de metástase regional e tempo de sobrevida livre de doença. Os resultados obtidos serão analisados e divulgados em forma de artigo científico e apresentação em eventos científicos.

AÇÃO FARMACOLÓGICA DAS ω-TOXINAS DA FRAÇÃO TX3 OBTIDA DO VENENO DA ARANHA PHONEUTRIA NIGRIVENTER NA VIA NOCICEPTIVA TRIGEMINAL

Pesquisadores envolvidos: Elizete Maria Rita Pereira (doutorado), Marcus Vinicius Gomez (orientador), Ricardo Santiago Gomez (co-orientador)

Os atuais medicamentos para o tratamento da dor podem ou não causar analgesia em alguns indivíduos. Além disso, eles estão associados a efeitos adversos intoleráveis quando utilizados por tempo prolongado. A promissora ação farmacológica das ω-toxinas da fração Tx3 obtida do veneno da aranha Phoneutria nigriventer no campo de pesquisa da dor tem sido, até o presente momento, demonstrada de uma forma geral. Assim, este estudo tem como objetivo avaliar os mecanismos de ação das toxinas da fração Tx3 obtida do veneno da aranha Phoneutria nigriventer sobre a via nociceptiva trigeminal. Para isso, será realizada a mensuração de glutamato, substancia P e CGRP por meio de ensaio imunoenzimático em perfusado de polpa dental humana pré-tratada com as ω-toxinas derivadas dessa fração Tx3. Também, será avaliado por microscopia confocal, o efeito do pré-tratamento com essas toxinas no aumento da [Ca⁺²]i disparado por KCl e capsaicina em cultura de neurônios do gânglio trigeminal de ratos wistar machos submetidos ou não a constrição do nervo infra-orbital. Por fim, o nível de expressão de múltiplos canais de cálcio ativados por voltagem em neurônios trigeminais, de animais submetidos à constrição do nervo infra-orbital, será determinado por western blot.

AVALIAÇÃO MOLECULAR DE CITOCINAS NA DOENÇA DO ENXERTO CONTRA O HOSPEDEIRO EM PACIENTES SUBMETIDOS AO TRANSPLANTE DE CÉLULAS- TRONCO HEMATOPOIÉTICAS

Pesquisadores envolvidos: Renata Gonçalves de Resende (doutorado), Natália Mendes de Matos Cardoso (iniciação científica), Jeane de Fátima Correia-Silva (co-orientadora), Ricardo Santiago Gomez (orientador)

O Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH) é estabelecido para o tratamento de diversas doenças hematológicas ou de outros tecidos, insuficiências medulares ou outros distúrbios congênitos da hematopoese. Complicações advindas do transplante são observadas e descritas na literatura podendo ocorrer em todas as fases do transplante. Uma das complicações que causa elevada morbidade e mortalidade é a doença do enxerto contra o hospedeiro (DECH). A DECH pode ser uma reação catastrófica e fatal onde as células histocompatível imunocompetentes do enxerto atacam o tecido do hospedeiro. Citocinas pró-inflamatórias e antiinflamatórias têm sido associadas à mediação e regulação da DECH. Desse modo, o conhecimento do estado de ativação das células T e de monócitos, além da expressão de citocinas derivadas dessas células, possibilita o melhor entendimento dos mecanismos biológicos envolvidos na ocorrência e na modulação da DECH após o TCTH. O objetivo deste estudo é investigar o estágio de ativação de células T e de monócitos em pacientes que apresentavam a DECH crônica, bucal e sistêmica, através da análise da expressão de moléculas relacionadas à ativação, memória e co-estimulação, assim como avaliar a produção das citocinas provenientes do sangue periférico de pacientes que apresentam a doença. Serão incluídos neste estudo, DECH crônica de pacientes submetidos ao alo-TCTH e pacientes controles saudáveis. A análise fenotípica das células T e monócitos é realizada por citometria de fluxo.

ESTUDO DA PERDA DE HETEROZIGOSIDADE EM REGIÕES DE GENES SUPRESSORES DE TUMOR EM LEUCOPLASIAS BUCAIS

Pesquisadores envolvidos: Thiago Fonseca Silva (doutorado), Carolina Cavalieri Gomes (orientador)

Segundo a Organização Mundial da Saúde (OMS) a leucoplasia bucal (LB) é classificada como sendo a principal lesão potencialmente maligna da boca. Neste contexto, estudos moleculares para rastreamento de possíveis genes que possam estar envolvidos no processo de carcinogênese vêm sendo alvo de várias investigações. Instabilidades genéticas são consideradas fontes potenciais de alterações moleculares em diversos genes associados aos processos de tumorigênese. Perdas somáticas em locus de genes supressores de tumor estão associadas a diversos cânceres e podem indicar uma susceptibilidade genética ao desenvolvimento do câncer. A perda de heterozigosidade (LOH) parece estar associada com os processos de carcinogênese através de alterações do padrão de expressão gênica ou mesmo nos eventos de inativação de genes supressores de tumor. Recentemente foi sugerido que a LOH de algumas regiões intergênicas poderia estar relacionada com a progressão das LB e conseqüentemente dos processos de transformação maligna. Essas características fazem destes mecanismos, alvos atrativos para a melhor compreensão dos eventos de gênese do câncer de boca. O objetivo deste estudo é investigar a perda de heterozigosidade (LOH) em marcadores localizados em regiões de genes supressores de tumor em LB e sua associação com a gradação histológica destas lesões.

AVALIAÇÃO DA EXPRESSÃO DE MICRORNAS NA LEUCOPLASIA BUCAL E NO CARCINOMA DE CÉLULAS ESCAMOSAS DE BOCA

Pesquisadores envolvidos: João Artur Ricieri Brito (doutorado), Ricardo Santiago Gomez (orientador)

A leucoplasia bucal (LB) é a mais importante lesão com potecialidade de transformação maligna da cavidade bucal. A gradação de displasia epitelial na LB tem sido feita levando em consideração os achados citológicos e histológicos, porém o padrão molecular de cada parâmetro utilizado nessa gradação não está bem estabelicido assim como sua implicação na transformação maligna da LB. MicroRNAs (miRNAs) são pequenas moléculas de RNA não codificantes que possuem a função de regulação pós-transcricional ou de degradação do RNA menssageiro. O objetivo do presente estudo é investigar a associação de cada alteração citológica e histológica usada para gradação da displasia bucal com a expressão de três miRNAs potencialmente associados com a progressão do câncer bucal. A expressão dos miRNAs é realizada através de Real-Time PCR (qPCR) em um conjunto de casos de leucoplasia bucal com diferentes graus de displasia, um conjunto de casos de carcinoma de células escamosas de boca e de mucosa bucal sem displasia.